Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) terdiri dari sel T, sel B, natural cell killer (NK), monosit dan sel dendritik. Dalam PBMCs masing-masing mengandung sekitar 70-85% limfosit dengan komposisi cluster of differential (CD), CD3+ terdiri dari CD4 dan CD8, sedangkan sel B (5-10%), monosit 5-20% sedangkan sel dendritik tidak banyak. 1-2%. Setelah diaktifkan, mereka berkembang menjadi beberapa subset T-helper (Th) Th1, Th2, Th17, Th9, Th22 dan sel-sel penolong folikel dan sel pengatur. Sitokin yang berperan dalam respon imun non spesifik di lingkungan mikro yang dapat mengaktifkan messenger protein p53. p53 adalah molekul vesikel ekstraseluler yang terlihat sebagai mediator dalam induksi apoptosis melalui sekresi beberapa molekul. Hal ini juga terjadi dengan aktivasi FAS ligand (FasL) dan APO2 ligand (APO2L)/apoptotic-inducing ligand (TRAIL) terkait tumor necrosis factor (TNF) dan disimpan dalam sitoplasma sel T.
Tujuan penelitian ini untuk menyelidiki aktivitas sel mononuklear darah perifer (PBMCs) melalui sekresi interleukin-2 (IL-2), interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10), C-X-C Motif Chemokine Ligand 13 (CXCL13) dan Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3 (TIMP-3) pada kultivasi (PBMCs) yang disensitisasi oleh Mesenchymal Stem Cell Secretome (MSCs) yang dikultivasi bersama dengan sel punca osteosarcoma (OS-SCs).
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen dengan rancangan post-test only control group design. Ini adalah studi in vitro PBMCs yang disensitisasi oleh MSCs saat sampel dibagi menjadi 4 kelompok perlakuan, : Perawatan nol hari (P0) PBMCs ditanam bersama dengan OS-SCs selama 0 jam; Perlakuan pertama (P1) PBMCs ditanam bersama dengan OS-SCs selama 1 jam; Perlakuan kedua (P2) PBMCs ditanam bersama dengan OS-SCs selama 2 hari; Perawatan ketiga (P3) PBMCs dikokultivasi dengan selama 4 hari. Metode pemeriksaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah flow cytometry dan indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Data dianalisis secara statistik dengan analisis varians (ANOVA) dengan p≤0,05 dianggap sebagai perbedaan yang signifikan. Peningkatan yang signifikan dalam sekresi ekstravesikular dalam sekresi IL-2, IL-6, IL-10, CXCL13, TIMP3, dalam PBMCs mikrovesikel ketika peka oleh sekretom MSCs yang ditanam bersama dengan lingkungan OS-SCs. dibudidayakan setelah hari keempat dengan perbedaan nyata antar kelompok (p≤0,05). Hasil pengamatan dan analisis dengan ANOVA pada semua perlakuan yang dibedakan berdasarkan waktu antara 0 jam, 1 jam, 2 hari, dan 4 hari menunjukkan perbedaan yang sangat nyata yaitu p≤0,05. Tingkat setiap variabel meningkat dari hari ke hari. Perbedaan yang signifikan antara jenis pengamatan yang diuji. Meskipun tidak ada perbedaan sekresi molekul IL-2 dan IL-6, jika dibandingkan dengan sekresi IL-10, CXCL13, dan TIMP13, terjadi peningkatan nilai OD yang signifikan. Selama 0 jam pengobatan, tidak ada perbedaan yang signifikan pada tes IL-2 dan TIMP-3 tetapi berbeda pada tes lainnya.
Ekstravesikel memiliki peran penting dalam lingkungan mikro terkait dengan faktor proinflamasi dan penghambat inflamasi, terutama didukung oleh asosiasi dengan sel kanker seperti fibroblas dan sel imun yang dapat menghambat pertumbuhan kanker. Penelitian molekul ekstravesikel yang mungkin berhubungan langsung dengan aktivitas WT-P53 dari PBMCs yang distimulasi sekretom menunjukkan peningkatan sekresi IL-2, IL-6, IL-10, CXCL-13, dan TIMP3. Sekretom mengandung sekitar 200 ribu molekul yang terdiri dari molekul kecil dan besar. Termasuk vesikel tambahan molekul kecil yang dapat memicu WT-P53 dan memaksa sel untuk mengeluarkan sitokin dan CXCL13 dan TIMP3. CXCL-13 adalah produk monosit (M1) untuk makrofag dan juga dapat dirangsang secara in vitro dengan BAG6 dan CBP/p300 tergantung asetilasi p53. IL-10 merupakan molekul yang larut karena bertindak sebagai mediator komunikasi antar sel untuk memodulasi respon imun terhadap kanker dan memiliki efek apoptosis. Peningkatan aktivitas ekstravesikular karena aktivasi WT-P53 melalui sekretom yang ditambahkan ke kokultivasi PBMCs dan OS-SC dapat mensekresi ekstravesikel di lingkungan mikro, di masa depan dapat dikembangkan menjadi topikal strategi terapeutik karena ekstravesikel merupakan produk aktivasi WT-P53 dalam menginduksi obat antiinflamasi. Metastasis ini dapat mengambil monosit patroli tumor-represif ke tempat metastasis yang terkait dengan inhibitor pada pemeriksaan imun.
Hasil penelitian ini didapatkan Mesenchymal Stem Cell Secretome (MSCs) dapat mengaktifkan mikrovesikel Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) seperti IL-2, IL-6, IL-10, CXCL13, TIMP3 ketika diko-kultivasi dengan Stem Cell Osteosarcoma (OS-SCs) setelah hari keempat secara in vitro secara signifikan. Namun, penelitian lebih lanjut masih diperlukan untuk menyelidiki mekanisme apoptosis yang tepat dari OS-SCs dengan berbagai metode.
Oleh :
dr. Fachrizal Arfani Prawiragara & Prof. Dr. Ferdiansyah, dr., Sp.OT(K)
Dept. Orthopaedi dan Traumatologi, Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga
Judul Jurnal : Activation Of Microvesicle Peripheral Blood Mononuclear Cells by Mesenchymal Stem Cells Secretome Co-Cultivated With Osteosarcoma Stem Cell
Authors : Fachrizal Arfani Prawiragara, Ferdiansyah
Dipublikasikan di : Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Reasearch
Link : https://jppres.com/jppres/co-cultivation-of-pbmcs-microvesicle-activated-by-mscs-and-os-ocs/
